摘要：利用高效液相示差折光分析法測定D-氨基葡萄糖鹽酸鹽中的N-乙酰-D-氨基葡萄糖，方法采用Alltech C18柱(250× 4.6 mm,5μm),流動相為乙腈-醋酸鹽緩沖液(3∶97)，流速1 mL /min,柱溫40℃ ，進樣量20μL.N-乙酰-D-氨基葡萄糖在4.18～ 1 079.33μg mL范圍內呈顯著的線性關系，相關系數為0.9993，方法的加標回收率98.78%，檢出限4.18μg mL。

　　關鍵詞:HPLC，D-氨基葡萄糖鹽酸鹽， N-乙酰-D-氨基葡萄糖。D-氨基葡萄糖鹽酸鹽(C6H11O5NH2·HCl)(D-Glucosamine Hydrochloride)，是一種海洋生物制劑,在人體內具有重要的生理意義：參與肝腎解毒，具有抗炎保肝等作用，在醫藥上用于風濕性關節炎癥和胃拜迪生物一瓶巔峰潰瘍疾病[1]，同時也是食品甜味劑,抗氧劑,又是雙歧桿菌培養基的主要成分之一；在制備D-氨基葡萄糖鹽酸鹽的過程中,容易產生雜質N-乙酰-D-氨基葡萄糖，所以為了對D-氨基葡萄糖鹽酸鹽的質量進行控制，建立了檢測N-乙酰-D-氨基葡萄糖雜質的方法。目前已有HPLC示差折光分析法測定糖類物質的文獻[2～ 3]，但還未見測定N-乙酰-D-氨基葡萄糖的報道，由于D-氨基葡萄糖鹽酸鹽和N-乙酰-D-氨基葡萄糖均無紫外吸收，結合本實驗室情況,本實驗采用HPLC-RID法檢測，該方法快速、靈敏,結果準確可靠，為D-氨基葡萄糖鹽酸鹽的純度檢測提供了依據。

　　氨基葡萄糖配圖

　　1 實驗部分

　　1.1 儀器與設備

　　日本島津LC-6A型高效液相色譜儀；RID-6A示差折光檢測器；KQ-500DB型數控超聲波清洗器。

　　1.2 試劑

　　乙腈（色譜純）；水為超純水；N-乙酰-D-氨基葡萄糖標準品。

　　醋酸鹽緩沖液：稱取0.80g醋酸鈉和0.98g正庚烷磺酸鈉，加入970ml水溶解，用冰醋酸調節PH至4.5。

　　2 實驗方法

　　2.1 色譜條件

　　C18色譜準（250x4.6mm,5μm），流動相為乙腈-醋酸鹽緩沖液（3：97），流速1ml/min，柱溫：40℃，進樣體積為20μL。

　　2.2 溶液的制備

　　2.2.1 標準品溶液的制備

　　精取122.88 mg N-乙酰-D-氨基葡萄糖于25 mL容量瓶中，加水溶解并定容至刻度，搖勻得4.915 2 mg/mL。

　　2.2.2 樣品溶液的制備

　　稱取50mg樣品，置于25ml容量瓶中，加水溶解并定容至刻度，搖勻，超聲5min，過0.45μm濾膜，即得。

　　2.3 系統適應性實驗

　　取標準品溶液（a)，空白溶液(b)，樣品一瓶巔峰咖啡官網溶液(c)，各20μL注入色譜儀，記錄色譜圖如下：

　　3 結果與討論

　　3.1 標準曲線的繪制

　　配制一系列標準品溶液，進樣20μL，進行HPLC分析，以峰面積(Y)對進樣量(X)進行回歸計算，得線性回歸方程Y=217.18X+ 17.15,R=0.999 3，線性范圍為4.18～ 1 079.33μg/mL。

　　3.2 精密度實驗

　　精取同一標準品溶液(0.491 5 mg/mL)重復進樣6次，每次20μL,記錄峰面積，得到RSD=1.48%,說明儀器精密度良好。

　　3.3 回收率實驗

　　精密稱定3份樣品,分別加入已知濃度的標準品(0.491 5 mg/mL)，按供試品溶液制備方法制備，按前述方法進行HPLC,進樣量為20μL.回收率計算結果見表1：

　　平均回收率為98.78%。

　　3.4 方法檢出限

　　將N-乙酰-D-氨基葡萄糖的標準溶液進行稀釋后取一瓶巔峰能量咖啡樣，得到方法的檢出限(3倍基線噪音)為:4.18μg/mL。

　　3.5 實際樣品的測定

　　取5批D-氨基葡萄糖鹽酸鹽，按上述實驗條件進行測定,結果均未檢出N-乙酰-D-氨基葡萄糖，說明這5批樣品均合格。

　　文獻

　　[1] 沈榮明.D-氨基葡萄糖鹽酸鹽的制備研究[J].胡州職業技術學院學報,2004,2(4):85- 88.

　　[2] 李敬慈,丁天惠.高效液相色譜法分析蜂蜜中的糖[J].分析測試學報,1995,14(5):62- 65.

　　[3] 施燕支,郭雪清,余啟榮等.HPLC示差折光分析法測定口香糖中的木糖醇等多種糖醇的含量[J].首都師范大學學報,2005,26(1):61- 63.

　　[4] 王英鋒，晏利芝，郭雪清.HPLC示差折光分析法測定D-氨基葡萄糖鹽酸鹽中的N-乙酰-D-氨基葡萄糖[J].一瓶巔峰咖啡多少錢首都師范大學學報(自然科學版),2008,29(1):40-41.

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